腺相关病毒包装-买球的app排行榜

一、实验原理

目前常用的腺病毒载体基于人腺病毒5型（ad5），其基因组是36kb长的线性双链dna。腺病毒可通过自身的纤维（fiber）和细胞表面的受体结合被内吞进入细胞，然后从内吞体（endosome）转移到细胞质和细胞核内，借助细胞的转录和翻译机器启动病毒的复制组装。一个完整的病毒生活周期会引发细胞死亡从而释放出病毒粒子。

目前最常用的腺病毒包装体系有adeasy和admax两种，其共同特点是目的基因首 先克隆到穿梭载体，然后再重组到腺病毒的大骨架上。这两个系统均具有腺病毒早期转录 复制基因e1和e3的缺陷(δe1, δe3)，其中e3基因对病毒产生并非必需。因此，腺病毒 包装必需依赖表达e1的细胞系，例如hek-293，hek-293a等。

相对于adeasy系统，admax系统操作便利，并且可以获得更好的病毒滴度。本操 作说明均基于admax系统，该系统由phbad系列穿梭质粒、腺病毒骨架载体pbhglox(delta)e1, 3cre双载体组成。

二、应用简介

腺相关病毒（adeno-associated virus，aav），也称腺伴随病毒，属于微小病毒科依赖病毒属，是目前发现的一类结构最简单的单链dna缺陷型病毒，需要辅助病毒（通常为腺病毒）参与复制。

重组腺病毒是一种复制缺陷的腺病毒载体系统，在基因治疗、基础生命科学研究等领域被广泛应用。重组腺病毒具有以下几个显著优点：感染范围广，几乎可以感染所有的细胞系、原代细胞和部分组织；感染效率高达100%，可全面超越其他病毒载体工具和脂质 体转染；对外源基因容载能力大（可以高达8kb）；不整合基因组；滴度高，操作方便。 因此，重组腺病毒是一种最具有潜力的基因递送工具。

实验平台的腺相关病毒血清型种类齐全，可提供aav1、aav2、aav3、aav4、aav5、aav6、aav7、aav8、aav9、aav-dj共10种血清型，而且还可以包装双链aav（scaav）。

腺相关病毒载体有cmv、mcmv、cag、pgk、rk1、ef1a、gfap等多种启动子可供选择；而且还有egfp、zsgreen、tdtomato、mcherry、eyfp等多种荧光标记蛋白可供选择；同时可以提供诱导型aav病毒的包装，如tet-on系统等。

可用于：常规基因过表达和干扰aav定制；  组织特异性启动子过表达aav定制；组织特异性dio aav的定制（需结合组织特异性cre工具鼠使用）；常规启动子和组织特异性启动子驱动的aav-cas9定制；aav-mrfp-gfp-lc3自噬流监测工具；各种aav介导的光遗传和化学遗传载体现货及改造服务等。

三、实验方法

四、样本送检要求

滴度:>108tu/ml

规格:1ml

赠送阴性对照病毒规格:0.2ml（>108tu/ml）

五、案例展示

腺相关病毒各血清型载体体外感染细胞系

六、常见问题

1、高纯度的低熔点琼脂糖储液可以配制在无菌pbs中，终浓度5%；使用之前用沸水浴完全融化， 然后自然降温到45℃待用。用37℃预热的完全培养基稀释5%的琼脂糖溶液到终浓度1.25%，混匀后马上加到去除培养基的细胞上，轻轻地覆盖均匀。6孔板每孔覆盖3 ml琼脂糖/培养基。

2、转染前细胞必须处于良好的生长状态。

3、收集细胞的时候一般使用细胞刮，不能用胰酶消化，4℃ 500´g离心10 min，去除大部分上 清，只留取2 ml上清重悬细胞沉淀进行-80℃（干冰或者液氮均可）冻融。

4、37℃冻融时一旦病毒融化就马上取出，长时间在37℃温育会降低病毒滴度，完全融化后可以剧烈 震荡30s。冻融周期通常会持续2~4次才可以获得高滴度的病毒。

细胞冻融结束裂解液可以4℃ 500×g离心10 min，不立即使用的话可以冻存在-20℃或-80℃。

七、服务流程