细胞增殖及活性检测-买球的app排行榜

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  • 细胞增殖及活性检测


    一、 实验原理

    细胞增殖是细胞在周期调控因子的作用下,通过dna复制 、rna转录和蛋白质合成等一系列复杂反应而进行的分裂过程,是生物体生长、发育、繁殖和遗传的基础。细胞增殖检测广泛应用于分子生物学、免疫学、肿瘤生物学、药理学等研究领域,是评价细胞代谢、生理和病理状况的重要方法。目前,常用的方法包括胸腺嘧啶核苷渗入法 、mtt检测法、羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂 (cfse)检测法等。但最直接精确的就是利用胸腺嘧啶核苷酸类似物检测新合成的dna,即5‐乙炔基‐2′脱氧尿嘧啶核苷(5‐ethynyl‐2′‐deoxyuridine,edu)和 5‐溴‐2′‐脱氧尿嘧啶核苷(5‐bromo‐2′‐deoxyuridine,brdu)标记。

    brdu是另一种嘧啶类似物,其化学结构特点是溴替代了胸腺嘧啶环与5位c原子连接的甲基,可竞争性掺入到s期新合成的dna中,利用免疫荧光技术标记增殖细胞,如同时结合其他细胞标记物进行双重染色,可判断细胞种类及增值速度,对研究细胞动力学有重要意义。

    edu是一种胸腺嘧啶核苷的类似物,其化学结构特点是脱氧胸腺嘧啶环上与5位c原子相连的甲基被乙炔基取代,在s期细胞增殖时可作为底物掺入到正在复制的dna链中, 通过与染料的共轭反应可以进行高效快速的细胞增殖检测,其中,乙炔基能够与一种荧光标记的小分子叠氮化合物探针反应,形成稳定的三唑环,该反应是一种被称“click”化学作用的cu+催化的环加成作用。edu的[3 2]环加成 作用由cu+催化完成,由于cu+盐的低溶解度,cu+通常以配基的形式引入到[3 2]环加成作用之中。


    二、应用简介

    目前,brdu标记新合成dna的方法在动物细胞组织的肿瘤生物学、遗传学、分子生物学等领域得到广泛应用。

    与传统的免疫荧光染色比较,edu反应非常快速,能在几分钟内完成,且不需要进行dna变性处理,只需简单的几个步骤,使得组织成像更简单易行,因此也适用于高通量筛选试验,尤其适合进行sirna、mirna、小分子化合物及其他药物的筛选实验。


    三、实验方法


         四、样本送检要求



    五、案例展示


    六、常见问题

    1、brdu配制方法:10mg容于10ml双蒸水,4℃避光保存。

    2、brdu会对肌体造成不可逆损伤,使用时注意安全,避免吸入brdu粉尘。


         七、服务流程


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