免疫共沉淀-买球的app排行榜

一、实验原理

免疫共沉淀是利用抗原和抗体的特异性结合以及细菌的protein g或a能特异性地结合到免疫球蛋白的fc片段的方法。其基本原理是在细胞裂解液中加入感兴趣蛋白的抗体，孵育后再加入与抗体特异结合的结合于磁珠的protein g或a，若细胞中存在与兴趣蛋白相结合的目的蛋白，就可以形成蛋白复合物：“目的蛋白—兴趣蛋白—抗兴趣蛋白抗体—protein g或a”；最后通过免疫印迹实验来检测目的蛋白。

当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质－蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质x的抗体免疫沉淀x，那么与x在体内结合的蛋白质y也能沉淀下来。co-ip确定的存在相互作用关系，但这种相互作用并不能确定使用直接作用还是间接作用。

1) 免疫共沉淀的优点

1.  相互作用的蛋白质都是经翻译后修饰的，处于天然状态。

2.  蛋白的相互作用是在自然状态下进行的，可以避免人为的影响。

3.  可以分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。

2) 免疫共沉淀的缺点

1.  可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白质－蛋白质相互作用；

2.  两种蛋白质的结合可能不是直接结合，而可能有第三者在中间起桥梁作用；

3.  必须在实验前预测目的蛋白是什么，以选择最后检测的抗体，所以，若预测不正确，实验就得不到结果，方法本身具有冒险性。

二、应用简介

co-ip、chip、rip、pulldown作为常见的分子互作验证方法。它们可以从检验的出发点来区分：co-ip、chip、rip是利用已知的蛋白检测体内相关蛋白、dna、rna，并通过蛋白抗体免疫沉淀分离目标蛋白、dna、rna。pulldown则是根据已知rna（rna pulldown）或者已知蛋白（gst pulldown）体外检验相关蛋白。

co-ip主要用于检测蛋白质与蛋白质之间相互作用，是ip实验的一种扩展， 基于ip反应的潜力，在样品溶液中捕获和纯化主要目标（抗原等）及通过天然相互作用靶标结合的其他的大分子。此外，还可以利用co-ip来确定在不同条件下的蛋白质相互作用。

三、 实验方法 

四、样本送检要求

五、案例展示

六、常见问题

1、实验样品制备方法准备：很重要！根据研究目的，检测样品可能是组织样品，也可能是细胞样品，不同样品制备流程不太相同，目的蛋白表达量也有较大差别，必须选择合适的样品和样品制备方法。

2、根据研究目的选择适合的蛋白特异性抗体：非常重要！用于co-ip实验的抗体是针对目的蛋白的特异性抗体，最理想的是选择一种能识别兴趣蛋白质某个表位的抗体，且这个表位不会被任何其他蛋白质相互作用所掩盖，比普通wb抗体要求高出很多；同时，抗体特异性和灵敏性尽可能高，才有可能有干净的背景和较好的ip效果，所以必须选择最适合的抗体用于co-ip实验。

3、未检测到目得蛋白或蛋白很少：

4、目得蛋白高背景：

七、服务流程